Microscopie con-focale

Nous disposons d'un microscope inversé (Axio-observer Z1), confocal, à balayage laser mono- ou bi-photonique. Ses principales caractéristiques sont:

- Platine motorisée en X, Y, Z.
- Objectifs de 10, 20, 40, 63, 100.
- 4 lasers visibles : laser Argon multi-raies : 458,488 et 514 nm, DPSS 561 nm, laser He- Ne 594 nm, laser He-Ne 633 nm.
- Laser IR Chaméléon Vision II avec système de pré-compensation.
- Détecteur Quasar (34 détecteurs spectraux composés de 2 PMT et du détecteur spectral 32 canaux), Détecteurs NDD.
- Logiciel ZEN 2010.

Nature des échantillons :

Il est possible d’observer des échantillons de matériaux, des échantillons biologiques fixés, ou des cellules vivantes. Une chambre environnementale permet de maintenir des cellules vivantes sur la platine, en régulant le taux de CO2 ou O2, l'humidité et la température. Une salle de préparation, équipée d’un cryomicrotome, d’un ultramicrotome, et d’une hotte à flux laminaire, est à disposition.

Acquisition:

-Multi-canaux
-Séries de coupes optiques selon Z (Z-stack), ou temporelles (Time Lapse)

Traitement: 

-Profondeur de champ étendue (image 2D projetée à partir de Z-stack)
-Analyse spectrale, déconvolution spectrale (ex. caractérisation de pigments organiques ou inorganiques, étude minéralogique sur lame mince)
-Co-localisation

Analyse

-Mesures
-Analyse d'image
-Expériences de photoblanchiment
-Physiologie (flux ioniques)
-Topographie (pour mémoire)

Le logiciel de visualisation ZEN Lite 2011 peut être téléchargé librement, ce qui permet de charger les images ainsi que leurs paramètres d'acquisition, pour les visualiser et les retoucher.

Solution ZEISS Zen Connect Microscopie corrélative :

  • Zen Connect est un module additionnel du logiciel Zen Blue LSM710 .

Les fonctionnalités de Zen Connect sont les suivantes :

    • Import d’images optiques issues de microscopes non-Zeiss : lecture des métadonnées via le moteur Bioformat. Cela permet d’utiliser en entrée des images Raman, IR, issues de binoculaires, de macroscopes, …
    • Import d’images optiques issues du microscope Zeiss LSM710, à platine manuelle
    • Les images optiques sont importées à différents grandissements, elles peuvent être alignées les unes relativement aux autres dans Zen Connect.
    •  Zen Connect contrôle la platine du MEB. D’un simple clic sur l’image optique on vient centrer l’image live du MEB sur la même zone (et grandissement équivalent).
    • Toutes les images (importées et acquises au MEB) sont affichées dans un même espace, superposées avec gestion de la transparence. L’interface de Zen Connect permet d’importer tout document sous forme d’image, par exemple : cartographies et spectres EDS, tout type de spectre, …
  • Principe Zen Connect Microscopie corrélative :

Un logiciel dédié (Zen Connect 2D) est installé sur le microscope optique / confocal à platine motorisée ET sur le MEB EVO. Cette approche repose sur l’utilisation de portes-échantillons spécifiques disposant d’un référentiel gravé au laser (3 grands « L » et 3 petits pour la détection précise). La détection du référentiel se fait de manière automatique dans Zen Connect 2D, par analyse d’image. Une fois le référentiel détecté, l’utilisateur se déplace librement sur l’échantillon à l’aide de la platine motorisée. Il acquière des images sur les zones d’intérêt et selon les techniques de contraste qu’il souhaite. L’échantillon est ensuite transféré au MEB en mode Vide partiel (10 à 133Pa), Pression étendue (10 à 3000Pa) . Le référentiel est détecté de manière automatique via Zen Connect 2D installé sur le MEB EVO. L’utilisateur ouvre ensuite les images optiques et vient simplement y définir des points ou régions d’intérêt. Le MEB s’y déplace automatiquement et adopte (lorsque cela est possible) la même valeur de grandissement que le microscope optique (lecture des métadonnées). Enfin, les images optiques et électroniques sont automatiquement recalées et affichées à l’échelle dans un espace unique (avec gestion de la transparence).

  • Avantages Zen Connect Microscopie corrélative:

Approche 100% automatisée, basée sur un référentiel unique.  Même s’il n’y a pas de structure reconnaissable entre images optiques et MEB, la passerelle corrélative peut se faire.

Zen Connect 2D peut importer des images optiques à des grandissements différents (ex : objectifs 2.5x, 40x). Celles-ci seront automatiquement alignées les unes par rapport aux autres.